文章導讀

近日，南京農業大學園藝學院汪良駒教授團隊研究論文“Study on the Mechanism of Exogenous 5-Aminolevulinic Acid (ALA) in Regulating the Photosynthetic Efficiency of Pear Leaves (外源 5-氨基乙酰丙酸 (ALA) 調節梨葉光合效率的機制研究)”在 Forests 期刊發表。該研究探討了外源ALA提高梨樹葉片光合作用的可能機制，為ALA在梨樹生產應用上提供了理論依據。

研究過程與結果

5-氨基乙酰丙酸 (ALA) 是一種新型植物生長調節物質，在植物生產中能夠起到多種調節作用，其中ALA提高植物光合作用效應尤為引人關注。2023年，汪良駒教授研究團隊制訂并發布了《5-氨基乙酰丙酸 桃樹施用技術規程》團標 (TJAASS 88—2023)，規范了ALA在桃上應用標準。但這個規程是否適用于其它樹種尚不清楚，ALA提高植物葉片光合效率的內在機制更需要深入研究。因此，作者以盛果期‘華山’梨為材料，參照TJAASS 88—2023要求，在果樹開花前一周用ALA稀釋液灌根防寒、在盛花后期噴花以去除過多花朵的基礎上，于幼果發育期葉片噴施ALA溶液，探討ALA對梨樹葉片光合能力的影響，通過葉片氣體交換參數、葉綠素快速熒光特性以及葉綠素合成、光合系統II電子傳遞載體相關基因表達等分析，以期闡釋ALA對梨葉片光合作用的調控機理。

1. ALA處理顯著促進梨葉片凈光合速率 (Pn) 等光合氣體交換參數

梨樹葉片噴施外源ALA后1周，葉片Pn就顯著高于對照。這種效應至少持續5周。5周間，ALA誘導的凈光合速率 (Pn) 平均增幅29.28% (圖1A)，ALA處理葉片蒸騰速率 (Tr) 平均比對照高出13.94% (圖1B)。與此類似，ALA處理后梨葉片氣孔導度 (Gsw) 整體上比對照高出18.73% (圖1C)。而且，梨葉片瞬時羧化效率 (Pn/Ci) 總平均值比對照增加32.30% (圖1E)，水分利用效率提高11.16% (圖1F)。由此可見，ALA處理提高梨樹葉片光合性能至少可以保持3~4周。

圖1. ALA處理對梨葉片光合氣體交換參數的影響。

2. ALA處理顯著促進梨葉片內源ALA的合成與代謝

研究結果顯示，外源ALA處理可以誘導梨樹葉片內源ALA含量增加。在ALA處理后5周內，外源ALA誘導的內源ALA含量增幅達41.99% (圖2A)。在此過程中，外源ALA處理一方面顯著提高內源ALA合成能力，5周內的平均值提高54.54% (圖2B)；另一方面，在ALA處理后第2周外源ALA處理促進梨葉片內源ALA代謝分解。這意味著，外源ALA噴施梨葉片不僅促進內源ALA合成，而且促進ALA代謝。外源ALA對內源ALA合成的促進效應至少保持5周。

圖2. 外源ALA對梨葉片內源ALA含量 (A)、生物合成 (B) 和代謝能力 (C) 的影響。

3. ALA處理顯著促進梨葉片光合色素的合成

如圖3A所示，ALA處理后第二周開始，處理葉片葉綠素相對含量 (SPAD) 均顯著高于對照。從圖3B-D看，ALA處理1周后梨樹葉片葉綠素a、葉綠素b以及葉綠素總量均顯著高于對照。盡管第2周兩者Chl b含量沒有差異，但其它時間點的差異均達到顯著水平，說明ALA處理促進梨葉片葉綠素積累，緩解其含量下降。具體來說，ALA處理葉片五周內Chl a、Chl b和葉綠素總量的平均值分別比對照高出11.38%、8.59%和10.44%。另外，ALA促進提高梨葉片Chl a/b比值，說明ALA促進葉片葉綠素a積累，但不利于a轉化為b。與此類似，ALA處理也可以促進葉片類胡蘿卜素 (Car) 含量上升 (圖3F)，且五周平均值比對照高出16.25%。

圖3. ALA處理對梨葉片光合色素含量的影響。(A) 葉綠素相對含量、(B) 葉綠素a、(C) 葉綠素b、(D) 總葉綠素含量、(E) Chla/b比值、(F) 類胡蘿卜素含量。

4. ALA處理對葉綠素合成相關基因表達的影響

為探究外源ALA提高梨葉片葉綠素含量的機理，作者分析了葉片噴施ALA后與ALA以及葉綠素生物合成相關的主要基因相對表達量。可以看出，催化ALA合成的兩個關鍵基因HEMA和GSA相對表達量在外源ALA處理后明顯上調。并且，ALA處理的葉片HEMF基因表達量至少在4周內顯著高于對照。類似的情況出現在HEMG (催化原卟啉原Ⅸ生成原卟啉Ⅸ) 和CHLH (催化原卟啉Ⅸ螯合Mg2+生成Mg-原卟啉Ⅸ)。CHLH是控制葉綠素生物合成分支的一個基因。從圖中看，ALA處理第1周葉片CHLH相對表達量顯著高于對照。這種效應可以維持3周。從整體上看，ALA促進其自身合成、代謝以及轉化為葉綠素的編碼基因表達，特別是處理后4周內，多數基因表達均受到不同程度上調。

圖4. 葉綠素生物合成途徑及ALA處理對梨葉片相關基因表達的影響。

5. ALA提高葉綠素合成關鍵基因PypHEMA和PypCHLH的啟動子活性

為了進一步探究ALA調控葉綠素合成機制，作者通過在煙草中進行的GUS染色實驗研究ALA對葉綠素合成過程中關鍵基因啟動子的影響。結果表明，外源ALA可以顯著增強PypHEMA和PypCHLH基因啟動子活性。因而，外源ALA處理可能通過上調內源ALA合成關鍵基因HEMA和葉綠素合成關鍵基因CHLH啟動子活性，促進基因表達，從而導致梨葉片葉綠素含量提升。

圖5. 外源ALA對ALA和葉綠素合成相關基因啟動子活性的影響。

6. 外源ALA處理對梨葉片PSII相關基因的影響

作者在葉綠素快速熒光曲線中觀察到ALA對梨葉片PSII反應中心 (PSII-RC) 光合電子傳遞效率的促進作用。為了探討其作用機制，作者還檢測了ALA處理后5周內PSII-RC主要成員編碼基因在梨葉片中的相對表達量。結果表明，ALA處理可以通過促進PSII-RC核心結構蛋白和其他功能小分子蛋白編碼基因的表達，來維持PSII反應中心的穩定性，促進植物光合作用。

圖6. PSII反應中心結構及ALA處理對梨葉片相關基因表達的影響。

研究總結

本文參照TJAASS 88—2023團標《5-氨基乙酰丙酸 桃樹施用技術規程》要求用ALA處理梨樹，至少可以在3周以上時間內維持較高的葉片光合效率，而且這種效應可以表現在多個方面。在葉綠素合成過程中，外源ALA不僅可以促進內源ALA合成與代謝，還可以促進葉綠素合成，增加光合色素含量；在光合電子傳遞過程中，ALA促進梨葉片PSII-RC核心蛋白基因表達，提高PSII-RC活性，促進光合電子傳遞和能量轉化。作者的研究證明了TJAASS 88—2023標準也適合于梨樹。而且，沒有展示的數據表明，ALA處理過的梨單果重增加19.7%，果實可溶性糖含量提高14.5%。這些結果為ALA在梨生產上應用提供了理論依據。